您好,欢迎来到聚合美!
010-59724293/13811994670
010-59724293
首页 > 胶回收/纯化试剂盒
M5 Hiper PCR & DNA Fragment Purification Kit(PCR片段纯化试剂盒)
货号 规格 销售价
MF030-01 50T 198.00
MF030-04 200T 768.00
  • 说明书:

    MF030-M5+PCR+&+DNA+Fragment+Purification+Kit.pdf

     

    M5 PCR & DNA Fragment Purification

    Kit使用说明书

    产品名称                            单位     货号

    M5 PCR & DNA Fragment Purification Kit   50T   MF030-01

    M5 PCR & DNA Fragment Purification Kit   200T  MF030-04

     

    储存条件

    常温运输,室温(15~30˚C)保存,保质期一年。如需长期保存,可将各试剂组分置于 2~8˚C,使用时如发现结晶,可于 37~55˚C水浴加热助溶。离心吸附柱不建议低温或大于 30˚C保存,否则可能影响吸附效率。

     

    产品简介

    M5快速 DNA 胶回收试剂盒利用利用硅基质材料在高盐缓冲系统对 DNA 高效、专一吸附的原理,配备聚合美自主研发的膜结合液(又称溶胶液)和高性能的硅胶膜离心吸附柱,用于纯化 PCR 反应产物或其他酶促反应体系中的蛋白质、残留 dNTP、引物、盐分等其他杂质,对引物二聚体的清除率在 70%以上。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20 μg,对 100 bp~10 kb 线性 DNA 片段的回收效率可高达 95%,也可应用于 20 kb 以下环形质粒的脱盐纯化。整个操作可在 10 分钟内完成,快速、简便。回收后的 DNA 可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。

     

    回收效率

    线性 DNA 片段大小          回收效率

    50 bp                               30~50%

    100 bp ~ 200 bp              50~70%

    200 bp ~ 5 kb              70~90%

    5 kb ~ 10 kb               50~70%

     

    产品组份

    50T         200T                     注意事项

    膜结合液(MB)        25ml        100ml             

    膜漂洗液(MW)       15ml         60ml           初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀

    洗脱缓冲液(EB)      10ml         30ml

    离心吸附柱及收集管     50套        200套           室温密闭干燥保存

                     

     

     

    实验准备

    用户需自行准备的材料:无水乙醇,异丙醇,台式离心机。

    初次使用本试剂盒,请按瓶标说明向膜漂洗液(MW)中加入相应体积的无水乙醇(用户自备),并在试剂瓶上做标记

     

    操作步骤

    DNA 结合:按每 1 μl DNA 样品加入 1 μl 膜结合液(MB)的比例(1:1)加入膜结合液,混匀后转移到插入收集管的离心吸附柱内,室温静置 1 分钟,室温下≥12,000 x g 离心 1 分钟,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱重新插回收集管中。

    离心吸附柱的最大吸附量为 20 μg,每次最多可离心 950 μl 溶液,如溶液体积大于 950 μl,可分批转移到同一吸附柱内,分次离心;若样品体积低于 50 μl,可用灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液(EB)补足至 50 μl,再加入 50 μl 的膜结合液(MB)。为增加小片段的回收效率,当回收的 DNA片段小于 300 bp 时,或大于3000bp时,可加入 11 体积的异丙醇。

     

    2.清洗:加入 700 μl 膜漂洗液(MW,请确认已加入无水乙醇)于离心吸附柱中,室温下≥12, 000 x g 离心 30 秒,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱重新插回收集管中。

     

    3.再次清洗:加入 500 μl 膜漂洗液(MW)于离心吸附柱中,重复离心一次。弃除废液后,将离心吸附柱去盖再次离心 1 分钟,彻底去除残余漂洗液。

     

    4.洗脱:小心取出离心吸附柱,将其套入一个新的 1.5 ml 灭菌离心管中。向硅胶吸附膜的中央加入 30 μl 洗脱缓冲液(EB),室温静置 1 分钟后,≥12,000 x g 离心 1 分钟收集纯化的 DNA 片段。

    为提高回收片段浓度,离心收集后可将洗脱后的溶液再次加入离心吸附柱中重复洗脱一次,可提高约 20%的产量;如必须使用无菌去离子水洗脱,需注意其 pH 值是否接近中性,否则应使用 NaOH 溶液将 pH 值调节至 7.0~8.5 之间。

     

    5.储存:弃除离心吸附柱,获得的 DNA 片段可直接用于后续反应或于-20℃长期保存。

     

     

    常见问题及解决方案

     

    问题

    可能原因

    解决方案

    回收效率低

    膜结合液(MB)使用量不当

    按1 µl DNA 溶液加入 1 µl 膜结合液的比例(1:1)加入膜结合液

    离心力不足, DNA 未与硅胶膜充分结合

    ≥12,000 rpm 离心,如果离心机达不到该转速,可适当延长离心时间以确保胶溶液完全通过硅胶膜

    膜漂洗液(MW)未添加乙醇

    第一次使用时按比例添加乙醇,并在试剂瓶上做标记

    洗脱溶液 pH 值不合适

    使用试剂盒提供的洗脱缓冲液(EB);如用去离子水洗脱,需将 pH 值调至 7.0~8.5 范围

    洗脱溶液体积过小

    使用 30 µl 以上洗脱溶液,加至硅胶膜的中央,静置 1 分钟,使膜完全浸润后再离心

    回收产物测序结果不佳

    用量太低

    提高测序反应使用的DNA量;如果回收产物浓度过低,可通过乙醇沉淀浓缩产物

    用量过高,干扰测序结果

    降低 DNA 用量,必要时用 EB 或灭菌双蒸水进行稀释

    TE 缓冲液干扰测序结果

    使用无 DNA 酶污染的洗脱缓冲液(EB)或灭菌双蒸水溶解 DNA 作为测序模板

    酶切效果不佳

    酶的质量低劣或使用方法不当

    按照厂家说明书正确使用酶;设立阳性对照检测内切酶活性

    膜漂洗液(MW)去除不彻底,胶回收产物中残留有乙醇或盐

    再次乙醇沉淀回收,并确保 DNA 溶液体积不高于酶切反应总体积的 10%

    电泳上样时漂出上样孔

    未添加上样缓冲液

    与适量上样缓冲液混合后上样

    膜漂洗液(MW)去除不彻底,胶回收产物中残留有乙醇

    确保洗涤步骤中洗涤缓冲液去除彻底,可增加离心时间或开盖放置一段时间使残留乙醇挥发

    回收产物电泳条带不锐利

    DNA 分子断裂

    混合等操作尽量小心,特别是大片段,应避免 DNA 因机械损伤而断裂

    其他 DNA 分子污染

    控制PCR反应条件,防止非特异性扩增

    DNA 分子降解

    PCR产物不能及时回收,应于 4℃保存,避免 DNA 降解

    克隆效率低

    离心吸附柱漂洗不彻底

    再次乙醇沉淀回收

    回收过程中有外切酶污染,导致DNA片段末端序列缺失

    回收过程保证无菌操作

    感受态细胞的效率差

    确保感受态制备和保存方法正确

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     


    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。