您好,欢迎来到聚合美!
010-59724293/13811994670
010-59724293
首页 > 超光速mix系列(不用提DNA,直接PCR)
高AT 物种M5 超光速mix(无需提取基因组DNA)
货号 规格 销售价
MF848-AT-01 1ml 148.00
MF848-AT-10 10x1ml 1098.00
MF848-AT-100 100x1ml 9398.00
  • 尊敬的聚合美超光速mix粉丝:

     

    非常感谢您对聚合美的支持和对新事物的拥抱,使用前请认真阅读《温馨提示》和《操作说明书》。

     

     

    超光速mix (MF848)使用“温馨提示”

     

     

    超光速mix (MF848)含有三个组分:一个是裂解液叫“扩增最佳伴侣”(MF859),一个2xPCRmix叫“超光速mix”,还配带了一管ddH2O,方便使用。

     

    本产品免基因组DNA提取:“扩增最佳伴侣”的作用是为了裂解细胞,释放出DNA当模板(请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系:样本太多会超出最佳伴侣的处理上限,导致裂解不完全;样本太少会造成模板浓度过低,导致PCR失败)。因为裂解液在特殊的情况下需要20-50ul,而标准裂解是20ul处理体系,可能会有客户单独购买裂解液的需求,所以也可以单独购买。

     

    在您收到本产品后,打开包装,将“扩增最佳伴侣”取出放在室温,使用前看看是否有沉淀,一定要确保裂解液没有沉淀,否则按说明书在37度溶解澄清后使用。

     

    样本处理量:菌液、菌体和液体样本,推荐是10ul处理体系。而植物和动物组织,推荐是20ul加入1-2平方毫米的样本,对于比较难处理的组织可以用50-100ul裂解液。务必采用适合的研磨方式来破碎组织,让细胞充分破裂释放DNA。

     

    研磨小技巧:1)将黄枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”,在2mlPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫;

                2)成熟叶片或较大组织,加入50-100ul裂解液在1.5ml 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁;

                3)种子或很厚样本(杨树叶片)需要先用液氮研磨,再取少数样本加入50-100ul裂解液;

                          

    可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎

     

    沸水浴处理5分钟,如果实验室没有沸水浴,也可以用PCR仪98度处理5分钟

     

    12000rpm离心1-2分钟,取1-2ul做PCR模板,剩余的放在-20度保存一个月以上,以备后续再次检测。再次取出做模板时,务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2ul做PCR模板。

     

    对于多糖多酚的植物样本(比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻)和动物鼠尾等样本,在沸水浴冷却到室温,加入等体积的氯仿振荡处理,然后12000rpm离心2分钟取上清,效果会有很大改善。

     

    因为不同物种的基因组GC含量不同,我们设置了几种2xPCRmix来对应。对于常见物种推荐MF848;而对于松树、杨树、棉花、黄瓜等基因组GC含量比较低,推荐MF848-AT;某些海洋生物GC含量非常高,推荐MF848-GC。MF848、MF848-AT、MF848-GC三者唯一的区别就是2xPCRmix不同,其他组分和操作都相同。

     

    MF848-01

    M5 超光速mix(鼠尾,昆虫,拟南芥,水稻,玉米,小麦等)

    1ml

    MF848-10

    10x1ml

    MF848-100

    100x1ml

    MF848-AT-01

    M5 高AT物种超光速mix(特指番茄,土豆,棉花,黄瓜,杨树,松树等)

    1ml

    MF848-AT-10

    10x1ml

    MF848-AT-100

    100x1ml

    MF848-GC-01

    M5 高GC物种超光速mix(特指褐藻,小球藻等)

    1ml

    MF848-GC-10

    10x1ml

    MF848-GC-100

    100x1ml

    M5 高AT超光速mix(无需提取基因组DNA)使用说明书

     

    产品名称              单位           货号

    M5 高AT超光速mix   1 ml     MF848-AT-01

    M5 高AT超光速mix  10×1 ml     MF848-AT-10

    M5 高AT超光速mix  100×1 ml    MF848-AT-100

     

    储存条件

     

    高AT超光速mix长期保存请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

    直接扩增最佳伴侣,收到后置于常温保存,如果4˚C或-20˚C保存出现结晶,请将该试剂置于 37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。

     

     

    产品简介

     

    本产品包含聚合美特制的M5 Hiper光速mix直接扩增最佳伴侣,可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁,短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板;同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解,是各种粗样品直接PCR的必备神器,可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。

     

    本产品包含高纯度M5 Hiper Plus Taq HiFi DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂,浓度为2×。M5 Hiper Plus Taq HiFi DNA 聚合酶比普通Taq酶扩增效率高、错配率低,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快(30-60秒1kb)等优点。可最大限度地减少人为误差,可用于高特异性PCR反应及GC含量较高(>60%)具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物的3’端附有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF019或MF020)。 本产品有含红色染料,在PCR 反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程,其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp 双链DNA 片段相近。

     

     

     

    产品组份

                                            储存温度   MF848-AT-01  MF848-AT-10   MF848-AT-100

    2x M5 Hiper高AT超光速mix (with red dye)    -20˚C       1 ml         10x1ml         100x1ml

    M5 Hiper超光速mix直接扩增最佳伴侣        常温       2x 2 ml         20x2ml        200x2ml

    Nuclease-free ddH2O                        常温        1 ml         10x1ml         100x1ml

     

     

     

    适用范围

     

     1.基因检测:本产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

    2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物,如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析(SNP)等。

     

     

     

    所需试剂

     

    使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。

     

     

    样本处理方法

     

    裂解液处理组织样品时取样切勿太多:10-20ul裂解液加入1-2mm21-2平方毫米)大小样本为宜!

     

    B、裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10。

     

    1、 菌液样品

     

    将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:2混合(5ul菌液:10ul最佳伴侣),直接沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    2、 平板上的菌落

     

    用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µl最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C或沸水浴5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续 PCR模板。

     

    3、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

     

      以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5ul样本:10ul最佳伴侣),95 ˚C或煮沸5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    4、植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)

     

    20ul裂解液加入2mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸5分钟,(棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘多糖多酚类样本,等上述样本冷却到室温加入20ul氯仿,Vortex 10),12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    5、动物组织样品(鼠尾、鼠耳等组织)

     

      20ul裂解液加入2mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸5分钟,(鼠尾、鼠趾富含胶质样本,等上述样本冷却到室温加入20ul氯仿,Vortex 10)12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

    6、 土壤等环境组织样品

     

    20ul裂解液加入2mm2(2平方毫米)样本,将固体样品尽量研磨,95 ˚C或煮沸5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

     

     

    PCR操作示例

     

    按下表配制PCR反应体系(冰上操作):

    Template DNA(上述步骤准备)  

    1-2µl

    2x M5 Hiper高AT超光速mix (with blue dye)                        

    10 μl

     Primer 1 (10 μM)                      

    0.5 µl

     Primer 2 (10 μM)                     

    0.5 µl

     Nuclease-free ddH2O补足至

    20 µl

     

    建议的PCR条件

     

    95°C

    3 min. 

    32-36 *cycles of:

     

    94°C

    25 sec. 

    55–64°C

    25 sec. 

    72°C

    30-60sec.** / kb DNA

    72°C

    5 min. 

    4°C

    forever

     

     

    PCR程序设置注意事项

     

    * 以粗提物为模板做PCR,因为模板量更少,循环数应比用CTAB提取DNA做模板PCR循环数多2-3个循环

     

    ** 以粗提物为模板做PCR,杂质比较多类似在水中跑步,降低扩增速度有利于得到稳定结果,建议延伸速度60秒/1kb

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。