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M5 HiPer “死活敏”Calcein AM /PI试剂盒(快速区分死细胞和活细胞,也可以染死活细菌)
货号 规格 销售价
MF939-01 100T 498.00
MF939-05 500T 1598.00
  • M5 HiPer Calcein AM /PI试剂盒说明书

     

     

    产品名称                  单位           货号

    M5 HiPer Calcein AM /PI试剂盒       100T         MF939-01

    M5 HiPer Calcein AM /PI试剂盒       500T         MF939-05

     

     

    储存条件】 4℃避光干燥,12个月

     

     

    产品简介

     

    钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI) 溶液,分别对活细胞和死细胞染色,可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜。尽管Calcein-AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein-AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光 (激发: 490 nm,发射: 515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm,发射: 617 nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定Calcein-AM和PI的合适浓度。

     

     

    产品组分

                             MF939-01     MF939-05

     

    Calcein-AM 4mM in DMSO      10uL          50uL

    PI (2mM) in water              30uL          150uL

     

     

    操作说明

     

    用荧光显微镜观察细胞形态,以HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度,有不同的观察条件。根据细胞条件,摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。

     

    染色溶液的配制

     

    将Calcein-AM储备液和PI储备液平衡到室温。

     

    2) 分别加2.5 µl Calcein-AM原液和12.5 µl PI原液至5 mL PBS(pH=7.4)中配制成染色工作液。染色工作液中Calcein-AM的浓度为2 µmol/L,PI的浓度约为5 µmol/L。

     

    细胞染色

     

    染色HeLa细胞等贴壁细胞时,先用Trypsin-EDTA等消化细胞,制备成细胞悬液。

     

    将细胞悬液离心3分钟 (1,000 rpm)。

     

    去除上清液,加入PBS缓冲液,细胞数量调整至10e5-106个/ml。再用移液器充分混匀。

     

    由于培养基中的血清等含有酯酶,Calcein-AM遇水分解,会导致空白上升,所以需离心数次,用PBS洗涤数次直到完全洗净。

     

    将200 µl细胞悬液移至小试管中,加入100 µl染色工作液,在37℃下孵育15分钟。

     

    在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。

     

    7) 在荧光显微镜下,先用490±10 nm波长激发,观察黄绿色的活细胞,还可以同时观察到红色的死细胞,然后用545 nm波长激发,能够看到红色的死细胞。

     

     

     

     

    染色试剂的最佳浓度

     

    Calcein-AM和PI最佳浓度根据细胞种类而定,通过以下的操作,可找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。

     

    通过在1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。

     

    用1-10 µM PI溶液对死细胞染色,以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。

     

    3) 用0.1-10 µM Calcein-AM溶液对死细胞染色,以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度。接着用该浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。

     

     

    注意事项

     

    Calcein-AM的ester部位遇到湿气会分解,使用后请在-20度下密闭冷冻保存,防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。

     

    2) 使用时一定要带手套、眼罩、口罩。万一接触到皮肤的话,迅速使用大量水清洗。

     

     

     

    参考图片

     

       

     

    Fig. 1 Cell staining with Double Staining Hela cell, incubated with assay solution for 15 min.

    A) viable cell; B) dead cell

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。