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M5 Hiper Multi-color Endofree Pureplasmid Maxi kit 多彩无内毒素质粒大提(电泳亮,可直接倒)
货号 规格 销售价
MF032-01 10T 898.00
  • 产品名称                                                                       单位      货号

    M5 Hiper Multi-color Endofree Pureplasmid Maxi Kit    10T   MF032-01

     

     

    储存条件

    室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A后的Solution I应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。若溶液II产生沉淀,应在使用前置于37下溶解沉淀后再使用

     

     

    产品简介

    本试剂盒适用于无内毒素高纯度质粒DNA的大量制备与纯化,柱上去除内毒素,操作简单。菌体经改良的碱裂解处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质,最后得到高纯度的无内毒素质粒DNA,所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、细胞转染等分子生物学实验。

     

     

    产品特色

     

    快捷、高效:颜色变化,适合判断;操作简便,得率高,节约时间;

     

    纯度高:沉淀致密,去杂干净;

     

    内毒素去除简单:柱上去除内毒素,方便快速,清除干净。

     

     

    产品组份

    试剂盒成分

    10 T

    Buffer BL

    25 ml

    Solution I

    100 ml

    Solution II

    100 ml

    Solution III

    100 ml

    ToxinOut Buffer

    60 ml

    Buffer WB2  (concentrate)

    60 ml

    Buffer EB

    30 ml

    RNase A (10 mg/ml)

    1 ml

    MaxiSpin Columns with Collection Tubes (50 ml)

    10个

    Collection Tubes (50 ml)

    10个

     

    注意:使用前将全部RNase A溶液加到Solution I中混合均匀,2 ~ 8℃保存;按要求在Buffer WB2中加入无水乙醇)

     

     

    注意事项

     

    细菌培养时间一般为12 ~ 16 小时(用锥形瓶或者试管摇菌,留够足够的空间让细菌接触空气,利于细菌生长),如接种量大则应减少培养时间,过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变;

    每次使用时都要注意Solution II和III是否形成沉淀,如有沉淀37℃溶解后再用;

    加入Solution II裂解细菌,直至溶液成紫红色粘稠透明状,时间过长会导致质粒DNA变性;

    质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。

     

    操作步骤

     

    柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入2.5 ml的平衡液BL10,000 rpm 离心2 min,弃收集管中滤液,将吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的柱子)

     

    取100 ~ 200 ml(如果是低拷贝质粒可以收集更多菌液)过夜培养的菌液,室温10,000 rpm离心2 min,弃上清。

     

    加入10 ml Solution I,旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀,呈现出均匀混浊的棕红色。

     

    注意:菌体沉淀一定要悬浮均匀,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低。

     

    加入10 ml Solution II,温和颠倒混匀使菌体完全裂解,直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。

     

    注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组DNA片段的污染,所用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏,如未完全变得清亮,可能是菌体太多,可增加Solution II的用量,在后续的操作中Solution III的用量也要相应增加。

     

    加入10 ml Solution III,立即温和颠倒混匀,可见红黄相间的絮状物产生,继续混匀直到完全变为黄色,室温静置2 min,然后10,000 rpm离心10 min,将上清转移至干净离心管(自备)中,注意不要带入沉淀。

     

    注意:Solution III加入后应立即混合,避免产生局部沉淀,如果上清中还有紫色漂浮物,说明复性不充分,继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色。

     

    加入0.3倍滤液体积的异丙醇,上下颠倒混匀。

     

    注意:加入异丙醇过多容易导致RNA污染。

     

    将步骤5中液体与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱中(使用当天用平衡液处理的吸附柱,放入50 ml收集管中),静置2 min,让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。10,000 rpm离心1 min,弃收集管中的滤液。

     

    注意:吸附柱的最大容积为15 ml,所以上步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时,建议加入吸附柱的溶液体积不超过10 ml,以防发生漏液现象。

     

    向吸附柱中加入5 ml ToxinOut Buffer,室温静置10 min,10,000 rpm离心1 min,弃收集管中滤液。

     

    加入10 ml Buffer WB2,室温10,000 rpm离心1 min,弃收集管中滤液。

     

    注意:Buffer WB2为浓缩液,按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防酒精挥发。

     

    加入5 ml Buffer WB2,室温10,000 rpm离心1 min,弃收集管中滤液。

     

    室温10,000 rpm离心5 min,甩干残留液体。

     

    将离心吸附柱置于一个新的50 ml塑料离心管中,打开管盖,放置5 min,使乙醇彻底挥发干净。

     

    加入1 ~ 2 ml 洗脱液Buffer EB,室温放置2 min,10,000 rpm离心2 min,离心管底溶液即质粒DNA。

     

    注意:为增加洗脱效率,可将得到的质粒溶液重新加入到吸附柱中重复步骤11一次,如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间。

     

     

     

    低拷贝或大质粒(>10 kb)提取

     

    如果所提质粒为低拷贝质粒,或大于10 kb的大质粒,或提取农杆菌质粒,或提取革兰氏阳性菌质粒,应加大菌体使用量,使用300 ~ 500 ml过夜培养物,最后洗脱液Buffer EB 60℃水浴预热,吸附和洗脱时可以适当延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。