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M5 Hiper Multi-color EndoFree Plasmid Mini Kit 多彩无内毒素质粒小提试剂盒
货号 规格 销售价
MF077-01 50T 398.00
MF077-04 4x50T 1568.00
  • 产品名称                                  单位        货号

     M5 EndoFree Plasmid Mini Kit    50T       MF077-01

    M5 EndoFree Plasmid Mini Kit   4x50T      MF077-04

     

     

    储存条件

     

    常温运输,室温(15~30˚C)保存。

     

     

    产品简介

    内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法,提取的质粒最大限度去除内毒素,并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染,操作简单方便。

      本试剂盒适合提取1-5 ml菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,通过新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA,每个吸附柱最高可吸附40 μg的质粒DNA,同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱,有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定,特别适用于细胞转染,同时也可用于DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等下游实验。

     

     

    产品组份

                                    50T                                    

    Buffer P1                      15 ml                     

    Buffer P2                      15 ml                       

    Buffer E3                      15 ml 

    Buffer PS                      15 ml                   

    Buffer PW (concentrate)         10 ml                   

    Endo-Free Buffer EB            10 ml      

    RNase A(10 mg/ml)          150 μl  

    Endo-Remover FM

    With Collection Tubes            50

    Spin Columns DM              

    With Collection Tubes            50                        

     

     

    实验准备

     

    1.所有组分可在干燥、室温(15-30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2-8℃可保存更 长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可稳定保存6个月。

     

    2.第一次使用前,将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混匀,置于2–8℃保存,使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。

    3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

     

    4.使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。

     

    5.注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3,使用后应立即盖紧盖子。

     

    6.提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

     

     

     

    自备试剂

    无水乙醇、异丙醇

     

     

    操作步骤

     

    1.取1-5 ml过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,13,000 rpm(~16,200×g)离心30秒收集细菌,尽量吸弃全部上清。

     

    2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。

     

    注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。

     

    3.向离心管中加入250 μl Buffer P2,温和上下颠倒混匀8-10次,使菌体充分裂解,室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。

     

    注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。

     

    4.向离心管中加入250 μl Buffer E3,立即上下颠倒混匀8-10次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。13,000 rpm离心5分钟,吸取上清,将上清加入过滤柱(Endo-Remover FM)中,13,000 rpm离心1分钟过滤,滤液收集在离心管(自备)中。

     

    注意:Buffer E3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。

     

    5.向滤液中加入225 μl异丙醇,上下颠倒混匀。

     

    6.柱平衡:向已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中加入200 μl Buffer PS,13,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

     

    7.将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。

     

    8.13,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

     

    注意:吸附柱的最大容积为750 μl,如果样品体积大于750 μl可分批加入。

     

    9.向吸附柱中加入750 μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。

     

    将吸附柱重新放回收集管中,13,000 rpm离心1分钟。

     

    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。

     

    将吸附柱置于一个新的收集管中,向吸附膜的中间部位加入50-100 μl Endo-Free Buffer EB,室温放置2-5分钟,13,000 rpm离心2分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

     

    注意:1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,13,000 rpm离心2分钟,将质粒溶液收集到离心管中。

     

    2)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Endo-Free Buffer EB65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。