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M5 HiPer Marine Animal DNA Kit 海洋动物基因组提取试剂盒
货号 规格 销售价
MF119-01 50T 598.00
  • M5 Marine Animal DNA Kit

    海洋动物基因组提取试剂盒使用说明书

     

     

    产品名称            单位        货号

    M5 Marine Animal DNA Kit      50T      MF119-01

     

     

    储存条件

    常温运输,室温(15~30˚C)保存。

     

     

    产品简介

    本试剂盒适合于从多种海洋动物(如鱼类、虾类、贝类等)组织中提取总DNA。纯化过程不需苯酚或氯仿等有机溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅胶质离心吸附柱上,其他污染物可流过膜,蛋白、PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步有效的洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

     

     

    产品组份

     
       

     

     

    50T                                   

    Buffer GTL                       15 ml

    Buffer GL                        15 ml                   

    Buffer GW1 (concentrate)          13 ml 

    Buffer GW2 (concentrate)          15 ml                  

    Buffer GE                        15 ml

    Proteinase K                       1 ml                  

    Spin Columns DM              

    With Collection Tubes               50                

     

     

    自备试剂

     无水乙醇

     

     

    实验准备

     

    1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

     

    2.第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

     

    3.使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,Buffer GTL和Buffer GL于56˚C水浴重新溶解。

     

    4.如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GTL后加入4 μl DNase-Free 的RNase A(100 mg/ml)。

     

     

    不同海洋动物组织提取得率

     

    样本           建议孵育时间       DNA 得率

    贝类组织            0.5 h           12-20 μg

    虾组织               1 h            8-14 μg

    鱼组织               1 h            15-40 μg

     
       

     

     

     

     

     

    操作步骤

     

    1.取不超过30 mg组织材料,液氮充分研磨后,放入离心管(自备)中,加入200 μl Buffer GTL,涡旋振荡15秒。

     

    注意:1)根据提取的组织不同,起始量也有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20 mg

     

    2)如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4 μl 100 mg/ml RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10分钟。

     

    2.加入20 μl Proteinase K,涡旋混匀,简短离心,使管壁上的溶液收集到管底。56˚C孵育,直至组织完全溶解,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。

     

    注意:不同组织裂解时间不同,通常需0.5-2小时即可完成。对于难裂解组织可以适当延长孵育时间。

     

    3.加入200 μl Buffer GL,充分颠倒混匀,70˚C孵育10分钟,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。

     

    注意:加入Buffer GL时可能会产生白色沉淀,一般70˚C放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。

     

    4.加入200 μl无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。

     

    5.将步骤4所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm(~13,400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

     

    6.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

     

    7.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

     

    注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7

     

    8.12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。

     

    注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。

     

    9.将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附柱中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20˚C保存DNA。

     

    注意:1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。

     

    2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

     

    3)用另外的50-200 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

     

    4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤9;若洗脱体积小于200 μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg,推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。

     

    5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20˚C保存。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    备注

    本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。